一、AIDS病原體檢測(cè)：目前檢測(cè)HIV的方法有100多種，可以分為抗體檢測(cè)和病毒檢測(cè)兩大類。
（一）病毒檢測(cè)：包括細(xì)胞培養(yǎng)(病毒分離)、p24抗原檢測(cè)和病毒核酸檢測(cè)。早期對(duì)HIV的診斷主要是通過(guò)血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)抗HIV的抗體,間接地診斷HIV感染。隨著生物科技的發(fā)展，近年來(lái)分子生物學(xué)方法不斷被應(yīng)用到HIV的檢測(cè)中，尤其核酸檢測(cè)已經(jīng)成為了HIV實(shí)驗(yàn)室診斷的發(fā)展方向，它可直接檢查HIVRNA,可在發(fā)現(xiàn)血清學(xué)變化之前檢測(cè)HIV感染,而且比P24抗原檢測(cè)方法更靈敏。
（二）抗體檢測(cè)：HIV抗體一般在人感染后幾周逐漸出現(xiàn),可延續(xù)至終生，血清學(xué)試驗(yàn)分為初篩和確認(rèn)試驗(yàn)。最常用的初篩試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)分別是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫印跡試驗(yàn)(WB)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫印跡試驗(yàn)、間接免疫熒光法(IFA)�？焖贆z測(cè)方法：明膠顆粒凝集試驗(yàn)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)、P24抗原的檢測(cè)、分子生物學(xué)方法、RT?PCR檢測(cè)法、熒光實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)技術(shù)、支鏈DNA(bDNA)、連接酶酶促鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、核酸序列依賴性擴(kuò)增(NASBA)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增(TMA)。
二、梅毒病原體檢測(cè)：
1、暗視野顯微鏡檢：暗視野顯微鏡檢查是一種檢查梅毒螺旋體的方法。暗視野，顧名思義即是顯微鏡下沒(méi)有明亮的光線，它便于檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查，對(duì)早期梅毒的診斷有十分重要的意義。
早期皮膚粘膜損害（一期、二期霉瘡）可查到蒼白螺旋體。一期梅毒蒼白螺旋體多在硬下疳的硬結(jié)、潰瘍的分泌物和滲出液中存在，腫大的淋巴結(jié)穿刺也可檢出。二期梅毒蒼白螺旋體可在全身血液和組織中檢出，但以皮膚檢出率最高。早期先天性梅毒，可以通過(guò)皮膚或粘膜損害處刮片發(fā)現(xiàn)梅毒蒼白螺旋體。最近，通過(guò)羊膜穿刺術(shù)獲得孕婦的羊水，以其作暗視野顯微鏡觀察，對(duì)先天性梅毒有診斷價(jià)值。
2、梅毒血清學(xué)檢測(cè)：梅毒血清學(xué)檢查對(duì)于診斷二期、三期梅毒，以及判定梅毒的發(fā)展和痊愈，判斷藥物的療效都有十分重要的意義。梅毒血清學(xué)檢查包括非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)。前者常用于臨床篩選及判定治療的效果，抽血后1小時(shí)即可出結(jié)果，費(fèi)用也低廉。后者主要是用于判定試驗(yàn)，但是它不能判定治療效果，一旦患有梅毒，這一試驗(yàn)將終身陽(yáng)性。
（1）非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)： 這類試驗(yàn)的抗原分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來(lái)檢測(cè)抗心磷脂抗體。由于這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似。常用的有三種：①性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL）；②血清不加熱的反應(yīng)素玻片試驗(yàn)（USR）；③快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）�？捎米髋R床篩選，并可作定量，用于療效觀察。
（2）梅毒螺旋體血清試驗(yàn)： 包括有：①熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）；②梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（TPHA）；③梅毒螺旋體制動(dòng)試驗(yàn)（TPI）等。這類試驗(yàn)特異性高，主要用于診斷試驗(yàn)。
（3）梅毒螺旋體IgM抗體檢測(cè)：梅毒螺旋體IgM抗體檢測(cè)是近年來(lái)才有的新的診斷梅毒的方法。IgM抗體是一種免疫球蛋白，用它來(lái)診斷梅毒具有敏感性高，能早期診斷，能判定胎兒是否感染梅毒螺旋體等優(yōu)點(diǎn)。特異性IgM類抗體的產(chǎn)生是感染梅毒和其他細(xì)菌或病毒后機(jī)體首先出現(xiàn)的體液免疫應(yīng)答，一般在感染的早期呈陽(yáng)性，隨著疾病發(fā)展而增加，IgG抗體隨后才慢慢上升。經(jīng)有效治療后IgM抗體消失，IgG抗體則持續(xù)存在，TP-IgM陽(yáng)性的一期梅毒病人經(jīng)過(guò)青霉素治療后，約2～4周TP-IgM消失。二期梅毒TP-IgM陽(yáng)性病人經(jīng)過(guò)青霉素治療后，2～8個(gè)月之內(nèi)IgM消失。此外，TP-IgM的檢測(cè)對(duì)診斷新生兒的先天性梅毒意義很大，因?yàn)镮gM抗體分子較大，其母體IgM抗體不能通過(guò)胎盤(pán)，如果TP-IgM陽(yáng)性則表示嬰兒已被感染。
3、基因檢測(cè)技術(shù)：特異性強(qiáng)，敏感性高，適用于梅毒孕婦羊水、新生兒血清和腦脊液標(biāo)本檢查，所謂PCR即多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，即從選擇的材料擴(kuò)增選擇的螺旋體DNA序列，從而使經(jīng)選擇的螺旋體DNA拷貝數(shù)量增加，能夠便于用特異性探針來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，以提高診斷率。但是，這種實(shí)驗(yàn)方法，要求有條件絕對(duì)好的實(shí)驗(yàn)室和技術(shù)一流的技師。其實(shí)診斷梅毒不一定要作PCR，作一般的抽血化驗(yàn)即可。
4、腦脊液檢查：晚期梅毒患者，當(dāng)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，經(jīng)過(guò)驅(qū)梅治療無(wú)效，應(yīng)作腦脊液檢查。這一檢查對(duì)神經(jīng)梅毒的診斷、治療及預(yù)后的判斷均有幫助。檢查項(xiàng)目應(yīng)包括：細(xì)胞計(jì)數(shù)、總蛋白測(cè)定、VDRL試驗(yàn)及膠體金試驗(yàn)。
三、淋病病原體檢測(cè)：
(一)涂片檢查：取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對(duì)有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽(yáng)性率在90%左右，可以初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽(yáng)性率僅為50-60%，且有假陽(yáng)性，因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌較少，陽(yáng)性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病，因?yàn)槠渌紊鷮僭谘什渴钦５木�。另外�?duì)癥狀不典型的涂片陽(yáng)性應(yīng)作進(jìn)一步檢查。
(二)培養(yǎng)檢查：淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證，培養(yǎng)法對(duì)癥狀很輕或無(wú)癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽(yáng)性就可確診，在基因診斷問(wèn)世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法。目前國(guó)外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的thayer-martin(TM)培養(yǎng)基和new york city(NYC)培養(yǎng)基。國(guó)內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制許多其他細(xì)菌生長(zhǎng)。在36℃，70%濕度，含5%-10%co2(燭缸)環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時(shí)觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進(jìn)行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)等鑒定。培養(yǎng)陽(yáng)性率男性80%-95%，女性80-90%。
(三)抗原檢測(cè)：
1、固相酶免疫試驗(yàn)，用來(lái)檢測(cè)臨床標(biāo)本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標(biāo)本需長(zhǎng)時(shí)間遠(yuǎn)送時(shí)使用，可以在婦女人群中用來(lái)診斷淋球菌感染。
2、直接免疫熒光試驗(yàn)：通過(guò)檢測(cè)淋球菌外膜蛋白i的單克隆抗體作直接免疫熒光試驗(yàn)。但目前在男女二性標(biāo)本的敏感不高，特異性差，加之實(shí)驗(yàn)人員的判斷水平，故該實(shí)驗(yàn)尚不能推薦用來(lái)診斷淋球菌感染。
(四)基因診斷：
1、淋球菌的基因探針診斷，淋球菌的基因探針診斷，所用的探針有：質(zhì)粒dna探針，染色體基因探針和rrna基因探針。
2、淋球菌的基因擴(kuò)增檢測(cè)，上面講述的探針技術(shù)檢測(cè)淋球菌的方法，雖然比培養(yǎng)方法在靈敏度，特異性和方便性上有了很大的提高，但其仍有一定的局限性，如多數(shù)情況下需要標(biāo)本的淋球菌濃度很高，pcr技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)的出現(xiàn)進(jìn)一步提高了檢測(cè)淋球菌的靈敏性，它具有快速、靈敏、特異、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，可以直接檢測(cè)臨床標(biāo)本中極微量的病原體。
四、非淋菌尿道炎病原體檢測(cè)：
1、直接免疫熒光法：將特異的衣原體單克隆抗體用熒光素標(biāo)記后檢測(cè)標(biāo)本中的衣原體抗原，如標(biāo)本中有衣原體，則和抗體結(jié)合，在熒光鏡下可見(jiàn)蘋(píng)果綠色的熒光，一張涂片中衣原體數(shù)在10個(gè)以上時(shí)為陽(yáng)性，特異性＞97%，敏感性為70%～92%。
2、血清學(xué)酶聯(lián)免疫法：用光譜測(cè)相儀檢測(cè)泌尿生殖道中的衣原體抗原，發(fā)現(xiàn)顏色改變?yōu)殛?yáng)性，24小時(shí)獲得結(jié)果，敏感性為60%～90%，特異性為92%～97%。
3、沙眼衣原體培養(yǎng)：沙眼衣原體為專性細(xì)胞內(nèi)寄生物，只有在活細(xì)胞中才能生長(zhǎng)繁殖，常用于衣原體培養(yǎng)的細(xì)胞是McCoy細(xì)胞和Hela229細(xì)胞，特異性為99%～100%，敏感性為68.4%～100%，是目前診斷沙眼衣原體的金標(biāo)準(zhǔn)。
4、解脲支原體培養(yǎng)：利用解脲支原體能分解精氨酸產(chǎn)氨，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸的原理，分別使含精氨酸的肉湯培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，指示劑顏色由黃變紅，葡萄糖肉湯培養(yǎng)基由粉紅色變?yōu)辄S色，該方法已廣泛應(yīng)用于臨床。
5、分子生物學(xué)：利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和連接酶聯(lián)反應(yīng)（LCR），敏感性和特異性均優(yōu)于其他方法，但要注意防止污染造成的假陽(yáng)性。
五、生殖器皰疹病原體檢測(cè)：
（一）細(xì)胞學(xué)檢查：挑取泡液或從皰底潰瘍面刮取少量皮損進(jìn)行涂片，通過(guò)Wright-Giemsa染色或Papanicolaou染色，尋找大的多核巨細(xì)胞和多核巨細(xì)胞核內(nèi)嗜酸包涵體。但此方法不能區(qū)別HSV感染或水痘-帶狀皰疹病毒感染等相關(guān)皰疹病毒類疾病，只有在急性期水皰出現(xiàn)時(shí)才可能得出陽(yáng)性結(jié)果。一般作為初篩試驗(yàn)。
（二）免疫細(xì)胞化學(xué)檢查：通常用皮損細(xì)胞涂片，經(jīng)特殊處理后在熒光顯微鏡下觀察檢測(cè)抗原，生殖器皰疹病毒感染細(xì)胞可見(jiàn)亮綠色熒光。
（三）病毒分離：通常用棉拭子從發(fā)病1-3天內(nèi)的水皰底部取得標(biāo)本，用人胚成纖維細(xì)胞、人羊膜細(xì)胞、腎細(xì)胞等進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)、再通過(guò)免疫熒光法鑒定、加以確認(rèn)。其分離成功的前提是取材的準(zhǔn)確和盡快接種，由于其操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴，技術(shù)條件要求高，目前尚不能普遍使用。
（四）抗體檢測(cè)法：HSV抗體檢測(cè)不能作為生殖器皰疹診斷的依據(jù)。但情況下，如判斷是否曾經(jīng)感染過(guò)HSV；癥狀不典型的感染者；評(píng)估生殖器皰疹患者配偶所生新生兒的感染風(fēng)險(xiǎn)以及單純皰疹預(yù)防接種時(shí)可能得到的成功率。這時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中HSV-1和HSV-2 IgM/IgG抗體。
(五)基因檢測(cè)法：用PCR熒光定量法檢測(cè)皮損的HSV-Ⅱ-DNA。能直接檢測(cè)出生殖器潰瘍性疾病患者損害部位的HSV-2病原體，敏感性和特異性高，大大提高生殖器潰瘍病人中HSV確診的能力。其費(fèi)用較昂貴，且操作技術(shù)、實(shí)驗(yàn)室條件和設(shè)備的要求也較高。
六、尖銳濕疣病原體檢測(cè)：
（一）醋白試驗(yàn)：以3%～5%的醋酸溶液浸濕的紗布包繞或敷貼在可疑的皮膚或黏膜表面，3～5分鐘后揭去，典型的尖銳濕疣損害將呈現(xiàn)白色丘疹或疣贅狀物，而亞臨床感染則表現(xiàn)為白色的斑片或斑點(diǎn)。醋白試驗(yàn)對(duì)辨認(rèn)早期尖銳濕疣損害及亞臨床感染是一個(gè)簡(jiǎn)單易行的檢查方法。對(duì)發(fā)現(xiàn)尚未出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)改變的亞臨床感染是一個(gè)十分有用的手段。醋白試驗(yàn)簡(jiǎn)單易行，應(yīng)作為尖銳濕疣患者的一個(gè)常規(guī)檢查手段，有助于確定病變的范圍，進(jìn)行指導(dǎo)治療。但醋白試驗(yàn)并不是個(gè)特異性的試驗(yàn)，對(duì)上皮細(xì)胞增生或外傷后初愈的上皮可出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。
（二）細(xì)胞學(xué)宮頸涂片檢查：主要用于檢查女性陰道或?qū)m頸上皮有否HPV的感染。在被檢部位刮取細(xì)胞并涂于玻片上，以95%酒精固定;常用巴氏染色法，鏡下所見(jiàn)分為五級(jí)。
（三）分子生物學(xué)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR):取病變組織或可疑部位樣品，提取DNA，利用特異引物對(duì)目標(biāo)DNA予以擴(kuò)增。引物可以是HPV通用引物，亦可以是針對(duì)某一型的特異引物。該法敏感性高，特異性強(qiáng)，但該方法應(yīng)該在通過(guò)相關(guān)機(jī)構(gòu)認(rèn)可或認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行開(kāi)展。
（四）免疫組化檢查：用帶有過(guò)氧化物的抗體檢查HPV抗原，對(duì)病原體進(jìn)行組織定位，有PAP法和ABC法。
七、軟下疳病原體檢測(cè)：
（一）抗體檢測(cè)法：在目前，抗體檢測(cè)應(yīng)用最廣泛的是HSV-2抗體檢測(cè)，如蛋白印跡法也可用GD2作抗原檢測(cè)HSV-2抗體，具有敏感性，且能區(qū)分HSV-1和HSV-2的優(yōu)點(diǎn)。
（二）血清學(xué)檢查：一般情況下，血清學(xué)檢查主要用于檢測(cè)抗HSV-1和抗HSV-2抗體，診斷HSV的原發(fā)性感染，進(jìn)行HSV感染的血清流行病學(xué)調(diào)查�？刹捎妹庖邿晒庠囼�(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫印跡試驗(yàn)和放射免疫試驗(yàn)等法檢測(cè)。
（三）電鏡檢查：經(jīng)過(guò)臨床觀察，發(fā)現(xiàn)取水皰液或病變腦組織制片，在電鏡下觀察病毒顆粒，陽(yáng)性率為百分之五十，但HSV與其他軟下疳病毒在形態(tài)上難以區(qū)分。免疫電鏡檢查較為特異。
（四）細(xì)胞培養(yǎng)法：通常，這種檢查方法從水皰底部取材做組織培養(yǎng)分離病毒，為目前最敏感、最特異的檢查方法，需時(shí)5天-10天。因其技術(shù)條件要求高，價(jià)格昂貴，目前尚不能普遍使用。
（五）基因檢測(cè)法：用PCR熒光定量法檢測(cè)皮損的HSV-2-DNA。能直接檢測(cè)出生殖器潰瘍性疾病患者損害部位的HSV-2病原體，敏感性和特異性高，大大提高生殖器潰瘍病人中HSV確診的能力。其費(fèi)用較昂貴，且操作技術(shù)、實(shí)驗(yàn)室條件和設(shè)備的要求也較高。
第四節(jié) 性傳播疾病病原體檢測(cè)